PyroSmart NextGen™ de Associates of Cape Cod, Inc. (ACC) es un reactivo Recombinante de Cascada (rCR) que marca la introducción de una nueva tecnología de reactivo de LAL recombinante y sostenible para los análisis de endotoxinas bacterianas (BET, por sus siglas en inglés).
PyroSmart NextGen™utiliza la misma cascada de los reactivos LAL tradicionales que proporciona los mismos resultados fiables que su reactivo de LAL convencional y ofrece estas ventajas adicionales:

  • No tiene contenido animal – Sin sangre de cangrejo herradura
  • Misma cascada de Reacción
  • Sin reactividad cruzada con los 1,3-b-D-glucanos
  • El mismo instrumento de lectura
  • Los mismos pasos de preparación
  • El mismo método
  • Satisface sus objetivos de sostenibilidad

MISMO MÉTODO

Como en los ensayos cromogénicos cinéticos, el clivaje del sustrato libera para-nitroanilina (pNA), que es de color amarillo y absorbe a 405 nm.
El cambio de absorbancia se mide a lo largo del curso del ensayo mediante un lector de absorbancia equilibrado a 37 ± 1ºC (ver Fig. 3). Cuanto mayor sea la concentración de endotoxina, más rápida será la liberación de pNA que conduce a un cambio más rápido en la absorbancia – consulte la diferencias entre 50 y 0,005 EU / mL en la Fig.1

Fig 1. Gráficos cinéticos para series de curvas estándar (50 a 0,005 EU / mL) con PyroSmart NextGen ™

Fig 1. Gráficos cinéticos para series de curvas estándar (50 a 0,005 EU / mL)
con PyroSmart NextGen ™

MISMO INSTRUMENTO

Considerando que la cascada y el método es el mismo, el ensayo de endotoxinas bacterianas con PyroSmart NextGen ™ se realiza utilizando los mismos equipos incubadores y lectores de absorbancia validados y con el mismo software como el que se utiliza para ensayos fotométricos cinéticos.
Un ejemplo de un lector de absorbancia de microplacas y el software para el ensayo PyroSmart NextGen ™ es ilustrado en la Fig.2

Figura 2: El Equipo lecto incubador BioTek® ELx808 ™ y la plataforma de Software Pyros® eXpress es una de las opciones utilizadas para el ensayo con PyroSmart NextGen ™. El Software Pyros® eXpress incluye un método predeterminado integrado para el ensayo con PyroSmart NextGen ™

Figura 2: El Equipo lecto incubador BioTek® ELx808 ™ y la plataforma de Software Pyros® eXpress es una de las opciones utilizadas para el ensayo con PyroSmart NextGen ™. El Software Pyros® eXpress incluye un método predeterminado integrado para el ensayo con PyroSmart NextGen ™

Como se muestra en la Fig.3, la curva estándar se construye mediante el trazado de los registros del Log Onset time (Eje Y) versus el Log de la Concentración del standard (Eje X ) y se utiliza para calcular las concentraciones de endotoxinas en muestras desconocidas.

Fig 3 Curva estándar para el ensayo PyroSmart NextGen ™ usando un ajuste lineal para el Log Onset Time vs. Log Concentracion

Fig 3 Curva estándar para el ensayo PyroSmart NextGen ™ usando un ajuste lineal para el Log Onset Time vs. Log Concentracion

El reactivo PyroSmart NextGen ™ como es un reactivo recombinante de cascada proporciona resultados que son:

• Rápidos (alrededor de 30 minutos para 0.005 EU / mL)
• Consistencia Lote a lote
• Específico para detección de endotoxinas
• Aplicable a una amplia gama de productos
• Equivalentes a los obtenidos por reactivos LAL tradicionales

PRESENTACION DEL PACK DE REACTIVOS
El reactivo PyroSmart NextGen ™ (PNG050-2) se proporciona como un pack con 2 viales de reactivo y 2 viales de tampón de reconstitución.
Esto es suficiente para un total de 110 celdas de la microplaca (55 celdas por vial).
Además se necesita adquirir un vial del Standard de Control de Endotoxina (ACC EC010-5) de 10 ng/vial calibrado frente al RSE con PyroSmart NextGen ™